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解淀粉芽孢杆菌PEBA20对柑橘绿霉病菌的抑制作用研究

已阅:31

宋宇静,李琳琳,张会玲   

(济南市章丘区农业局, 山东济南 250200

摘要:本试验主要以柑橘绿霉病菌为靶标菌,采用平板对峙法检测解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)抑菌活性,并检测其无细胞滤液的抑菌效果,无细胞滤液利用摇瓶发酵后经微孔滤膜过滤制备, 采用菌落生长速率法确定其抑菌效果。

关键词解淀粉芽孢杆菌;柑橘青绿霉病菌;抗菌活性 

1研究的目的及意义

有些微生物在生长过程中能产生抑制真菌的分泌物,这就为利用微生物抑制植物病原真菌,防止植物真菌病害提供了新的可能[1]。芽孢杆菌能产生多种抑菌物质,且对人畜无害,不污染环境,常用于防治多种植物病害,因而在生物防治植物病害中起着重要的作用。有关芽孢杆菌的控病作用机制,国内外学者从各个角度进行了广泛探讨,概括起来主要有竞争、拮抗、诱导植物抗病性和促进植物生长等几个方面[2]。芽孢杆菌的竞争作用主要包括营养竞争和空间位点竞争,即在植物根际、体表或体内及土壤中快速、大量繁衍和定殖,有效地排斥、阻止和干扰植物病原微生物在植物上的定殖与侵染,从而达到抑菌控病效果。拮抗作用主要指两种或两种以上的微生物共同生长时,一种微生物在同化作用中产生某种或某几种特异的次生代谢产物(如抗菌素等抗菌物质),改变其微环境,从而抑制甚至杀死另一种微生物的现象。芽孢杆菌可产生抗生素、细菌素、细胞壁降解酶类和其它抗菌蛋白及挥发性抗菌物质等拮抗物质[3]

2试验方法

2.1 柑橘绿霉病病原菌的分离及鉴定

采用无菌操作,用接种针从感病柑橘中挑取少量皮下果肉接种在配制好的PDA培养基上分离培养并纯化后,得单一菌种,25 恒温培养并定期观察菌落的颜色和形状。

绿霉病病原菌属半知菌亚门丝孢纲。绿霉病病原菌的分生孢子梗无色,先端具12 个分枝,扫帚状,小梗中部稍宽,上下端稍狭细,呈细长纺锤状,其上串生分生孢子,分生孢子单孢无色,卵形,较大。经显微镜观察,所纯化菌种符合以上特征,因此确定分离的病原菌是绿霉病病原菌。

2.2解淀粉芽孢杆菌PEBA20菌活体对柑橘绿霉病菌菌落生长的抑制作用

抑制率(%=[(对照菌落半径处理菌落半径)/对照菌落半径]×100

2.3解淀粉芽孢杆菌PEBA20发酵液对柑橘绿霉病菌孢子萌发的抑制作用

孢子萌发抑制率(%= [(对照孢子萌发率-处理孢子萌发率)/对照孢子萌发率]×100

3试验结果

3.1 解淀粉芽孢杆菌PEBA20菌活体对柑橘绿霉病菌菌落生长的抑制作用结果

 

CK菌落半径(mm

均值(mm

处理组菌落半径(mm

被抑制菌落半径(mm

抑制率%

平均抑制率%

1

34.5

32.26

8.8

23.46

72.72

69.62

2

31.0

10.1

22.16

68.69

3

31.3

10.5

21.76

67.45

4

 

9.8

22.46

69.62

解淀粉芽孢杆菌PEBA20对柑橘绿霉病菌有较强的抑制作用,菌落被抑制边缘菌丝颜色加深,呈铁锈色,出现抑菌带,白色菌丝层稀少。

3.2解淀粉芽孢杆菌PEBA20对柑橘绿霉病菌菌丝生长的致畸作用

    解淀粉芽孢杆菌PEBA20 产生的抗生物质使菌丝的正常生长受到抑制,菌丝的生长速率明显减慢,同时菌丝产生了一些畸变形态,主要变现为:菌丝分支增多、菌丝细胞间距变小、原生质浓缩菌丝颜色加深。                                                        3.3 解淀粉芽孢杆菌PEBA20发酵液对柑橘绿霉病菌孢子萌发的抑制作用结果

CK

发酵液处理

 

萌发的孢子数量(个)

未萌发的孢子数量(个)

萌发率(%

平均萌发率(%

萌发的孢子数量(个)

未萌发的孢子数量(个)

萌发率(%

萌发抑制率(%

平均萌发抑制率(%

1

291

25

92.09

93.25

116

127

47.74

48.80

59.02

2

283

23

92.48

95

204

31.77

65.93

3

335

17

95.17

105

194

35.12

62.33

经过预实验可知柑橘绿霉病菌孢子萌发的高峰期在14h,孢子萌发率达到90%以上, PEBA20发酵液对柑橘绿霉病菌孢子萌发的抑制率达到59.02,致畸作用不明显,显微镜下没有观察到异常萌发的孢子形态。这说明PEBA20发酵液对柑橘绿霉病菌孢子萌发的抑制作用不明显,可能只是延缓了孢子萌发的进程。

4结论

    解淀粉芽孢杆菌PEBA20对柑橘绿霉病菌菌丝的生长有较好的抑制作用,能够明显抑制病原菌菌落的生长。

 本文来源:《新农民》杂志/期刊